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1、技術(shù)原理 

首先通過PCR擴增含有SNP的基因[1]組片段，然后通過序列特異性引物實現(xiàn)單堿基延伸，隨后樣品分析物與芯片基質(zhì)共結(jié)晶后在真空管中受瞬時納秒 (10-9s) 強激光激發(fā)。核酸分子因此解吸附成為單電荷離子，由于電場中離子飛行時間與離子質(zhì)量成反比，通過檢測核酸分子在真空管中的飛行時間而獲得樣品分析物的分子量，從而檢測出SNP位點信息。 
 
2、主要特點 

時間飛行質(zhì)譜（MALDI-TOF）完成的SNP檢測準確率可達99.9%，除了準確性高、靈活性強、通量大、檢測周期短等優(yōu)勢外，zui有吸引力的應該還是它的性價比。飛行時間質(zhì)譜平臺（MALDI-TOF）是通用的基因單核苷酸多態(tài)性（SNP）的研究平臺，該方法憑借其科學性和準確性已經(jīng)成為該領(lǐng)域的金標準。 
 
3、主要方法 

1. TaqMan探針法 
針對染色體上的不同SNP位點分別設計PCR引物和TaqMan探針，進行實時熒光PCR擴增。探針的5’-端和3’-端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。當溶液中存在PCR產(chǎn)物時，該探針與模板退火，即產(chǎn)生了適合于核酸外切酶活性的底物，從而將探針5’-端連接的熒光分子從探針上切割下來，破壞兩熒光分子間的PRET，發(fā)出熒光。通常用于少量SNP位點分析。 
 
2. SNaPshot法 
該技術(shù)由美國應用生物公司（ABI）開發(fā)，是基于熒光標記單堿基延伸原理的分型技術(shù)，也稱小測序，主要針對中等通量的SNP分型項目。在一個含有測序酶、四種熒光標記ddNTP、緊臨多態(tài)位點5’-端的不同長度延伸引物和PCR產(chǎn)物模板的反應體系中，引物延伸一個堿基即終止，經(jīng)ABI測序儀檢測后，根據(jù)峰的移動位置確定該延伸產(chǎn)物對應的SNP位點，根據(jù)峰的顏色可得知摻入的堿基種類，從而確定該樣本的基因型。對于PCR產(chǎn)物模板可通過多重PCR反應體系來獲得。通常用于10-30個SNP位點分析。 
 
3. HRM法  
高分辨率熔解曲線分析（HRM）是近幾年興起的SNP研究工具，它通過實時監(jiān)測升溫過程中雙鏈DNA熒光染料與PCR擴增產(chǎn)物的結(jié)合情況，來判斷是否存在SNP，而且不同SNP位點、是否是雜合子等都會影響熔解曲線的峰形，因此HRM分析能夠有效區(qū)分不同SNP位點與不同基因型。這種檢測方法不受突變堿基位點與類型的局限，無需序列特異性探針，在PCR結(jié)束后直接運行高分辨率熔解，即可完成對樣品基因型的分析。該方法無需設計探針，操作簡便、快速，成本低，結(jié)果準確，并且實現(xiàn)了真正的閉管操作。